اختبار

اختبار لقياس الطاقة المضادة للأكسدة

مقال ABTS

هذه طريقة تحليلية تستخدم قياسًا طيفيًا لتحديد قدرة مضادات الأكسدة في العينة. يستخدم مقياس طيف UV-Vis لقياس امتصاص محلول يحتوي على جذور ABTS + + ، المتولدة عن أكسدة ABST (2،2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulphonate) ، وهي مادة عديمة اللون على شكل يتم تلوين الراديكاليتيا عن طريق امتصاص الأطوال الموجية المميزة في المدى المرئي. وإضافة الجزيئات المضادة للأكسدة إلى المحلول ABTS • + ، والتي يمكن أن تعمل من خلال كل من الهيدروجين ونقل الإلكترون ، تحدد الحد من الجذور إلى الشكل عديم اللون ، مع ما يترتب على ذلك من تغيير لون خليط التفاعل. يمكن تغيير هذا اللون ، متناسب مع كمية مضادات الأكسدة الموجودة ، كخفض في الامتصاص في وقت معين عند طول موجة محدد (734 نانومتر). يتم التعبير عن قوة مضادات الأكسدة بالمقارنة مع قيم الامتصاص المقاسة بكميات معروفة من جزيء مضاد للأكسدة يتم اختياره كمعيار مرجعي ، والذي عادة ما يكون حمض الاسكوربيك أو Trolox (في هذه الحالة هناك حديث عن النشاط المضاد للأكسدة TEAC Trolox مكافئ القدرات).

يتميز قياس القدرة المضادة للأكسدة على أساس استخدام ABTS بكونه بسيطًا وسريعًا. وعلاوة على ذلك ، فإنه يسمح لقياس كل من مضادات الأكسدة hydrophilic ومحبة للدهون في نطاق واسع درجة الحموضة. ومع ذلك ، يجب أن نضع في اعتبارنا أن الراديكالية المستخدمة (ABTS • +) ليست فيزيولوجية وغير موجودة في النظم البيولوجية وأن مشاكل قابلية التكرار للقياس بسبب حركية التفاعل لمضادات الأكسدة المختلفة المعنية غالباً ما يتم إبرازها.

FRAP (Ferric Reducing Anti Oxidant Power)

يقيس اختبار FRAP قدرة تقليل مضادات الأكسدة ضد أيونات الحديد. إنها طريقة تعتمد على نقل الإلكترونات ، حيث تمر أيونات الحديد من Fe3 + إلى Fe2 +. في ظل ظروف معينة من درجة الحموضة (3.6) وفي وجود TPTZ (2،4،6-تريس (2-بيريريد) -s-تريزازين) ، تشكل هذه الأيونات معقدات ذات خصائص مختلفة ، ولا سيما المشتقة المخفضة (Fe2 +) -TTPTZ) يأخذ اللون الأزرق الذي لديه أقصى امتصاص عند 593 نانومتر والذي يمكن قياسه الطيفي. وبالتالي يمكن قياس قدرة تقليل مادة مضادة للأكسدة كاختلاف في امتصاص المحلول الذي يحتوي على المؤكسد عند طول الموجة المحدد للمقارنة مع الاختلاف النسبي للمعيار (مثل حمض الأسكوربيك).

تم تصميم اختبار FRAP لقياس الطاقة المخفضة للبلازما ، ولكن تم تكييفها بعد ذلك لاختبار قدرة مضادات الأكسدة من المركبات الصرفة والمصفوفات المعقدة. في الواقع ، بما أن هذه الطريقة تسمح فقط بتقييم القدرة المختزلة من خلال نقل الإلكترونات ، مع تجاهل عمل مضادات الأكسدة التي تعمل من خلال نقل الهيدروجين ، فإنها لا تسمح بقياس مساهمة الجزيئات ، مثل الثيول والبروتينات ، التي تلعب دورًا مضادًا للأكسدة. أساسي في السوائل البيولوجية (مثل الدم). الميزة في استخدام هذه الطريقة هو أنها واحدة من أبسط الطرق وأسرعها وأقلها تكلفة لتحديد قدرة مضادات الأكسدة في المختبر.

اختبار DPPH

2-2- ثنائي فينيل-1-بيكرليدرازيل (DPPH •) هو جذور نيتروجين مستقر جداً ومتاح تجارياً ، ويتميز بلون أحمر أرجواني مكثف ، يزيل اللون عندما ينخفض ​​في وجود جزيء ذي قدرة مضادة للأكسدة. من خلال القياس الطيفي عند 517 نانومتر من اختلاف الامتصاص لمحلول DPPH بعد التفاعل مع مركب مضاد للأكسدة ، من الممكن تحديد سعة تقليل مادة الاختبار سواء أكانت تعمل بنقل الهيدروجين أو بنقل الإلكترون. يتم التعبير عن النتيجة بشكل عام على أنها IC50 ، أي كمية مضادات الأكسدة القادرة على تقليل التركيز الأولي لـ DPPH بنسبة 50٪.

إنها طريقة سريعة وبسيطة واقتصادية. تُعطى حدود هذه التقنية التحليلية من خلال إمكانية تزوير نتائج التحليل في الحالة التي تمتص فيها جزيئات الاختبار في نفس نطاق الطول الموجي مثل جذور DPPH أو في وجود جزيئات كبيرة مثقلة بشكلٍ معقد تتفاعل مع الجزء التفاعلي من الجذر. هذا يحدد أن DPPH يتفاعل مع مضادات الأكسدة حتى 1000 مرة أبطأ من براكسيل peroxyl.

اختبار PCL (ضوئي ضوئي)

يعتمد اختبار PCL على تفاعل نوع معين من الأجسام الراديكالية ، وهي أنيون الأكسيد الفوقي (O2) -) ، التي تم توليدها ضوئياً بواسطة الأشعة فوق البنفسجية ، مع مركب قادر على بث الإشعاع الكيميائي. إن العلامة المستخدمة هي luminol ، وهو جزيء يقوم عند تأكسده بواسطة الجذور الحرة بانبعاث ضوء يمكن قياسه باستخدام أداة خاصة (Photochem®). يؤدي وجود مضادات الأكسدة في خليط الحصص الغذائية إلى إبطال نشاط الأنواع الجذرية عن طريق تثبيط انبعاث الإشعاع الكيميائي. تحليل PCL سريع جدا وحساس. علاوة على ذلك ، مع تطبيق بروتوكولين تحليليين مختلفين ، يسمى ACW (قدرة مضادة للأكسدة قابلة للذوبان في الماء) و ACL (قدرة مضادات الأكسدة القابلة للذوبان في الدهون) ، يمكن قياس المساهمات في إجمالي القدرة المضادة للأكسدة لكل من المكون القابل للذوبان في الماء (الفلافونويد ، الفيتامين) لنفس المركب C ، والأحماض الأمينية ، وما إلى ذلك) التي من liposoluble واحد (tocopherols ، tocotrienols ، carotenoids ، وما إلى ذلك). للمقارنة بين القيم المسجلة مع القياسات المتعلقة بالجزيئات المرجعية القياسية ، وحمض الأسكوربيك لبروتوكول ACL و Trolox لبروتوكول ACW ، يتم الحصول على القدرة المضادة للأكسدة لمنتج الاختبار.